A | B | C | D | E | F | G | H | CH | I | J | K | L | M | N | O | P | Q | R | S | T | U | V | W | X | Y | Z | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9
Kvantitativní polymerázová řetězová reakce (nejčastěji označované jako Real-time PCR nebo qPCR) je metoda založena na principu klasické PCR, umožňuje však kvantifikaci sledovaného úseku DNA v reálném čase. Na rozdíl od běžné PCR, kde se analyzuje až výsledný produkt (amplifikovaná DNA) pomocí elektroforézy v agaróze, je při Real-time PCR zaznamenáván každý cyklus PCR ve skutečném čase. Záznam amplifikace je založen na principu fluorescence, kdy se používají sondy (fluorescenční látky), které se vážou specificky nebo nespecificky na amplifikované DNA.
Prostředky
Kvantitativní polymerázová řetězová reakce je podobně jako klasická PCR prováděna v přístroji termocyklér, který je oproti klasické verzi vybaven optickým zařízením pro snímání intenzity fluorescenčního záření ze sond v reálném čase. Optický signál je zaznamenáván a zpracováván specializovaným software prostřednictvím matematických metod.
Metody
Metody Standardní křivky
Za účelem kvantifikace určitého úseku DNA jsou hojně využívány metody [1] založené na konstrukci tzv. standardní křivky. Při této metodě je nejprve na základě naměřených fluorescenčních intenzit pro každý vyšetřovaný vzorek vytvořena tzv. amplifikační křivka. Následně je na základě dané prahové hodnoty pro každou amplifikační křivku určen bod tzv. Crossing point (CT). Lineární regresí CT bodů od standardů (vzorků se známou počáteční koncentrací sledovaného úseku DNA) je sestavena standardní křivka, která představuje závislost počáteční koncentrace vzorků na intenzitě naměřeného fluorescenčního záření. Dosazením CT bodů od neznámých vzorků do příslušné standardní křivky jsou následně získány přibližné hodnoty jejich počátečních koncentrací pro vyšetřovaný segment DNA.
Metoda MAK 2
MAK2 (Mass Action Kinetic with 2 parameters) empirický model, který vyžaduje pouze jeden standardní vzorek a svou přesností se vyrovná klasické metodě využívající standardní křivku. Tento model se hodí pro POCT (Point of Care) systémy, kde by příprava více standardů zdržovala. Metoda byla odvozena [2] na základě reakční kinetiky v exponenciální fázi PCR. Od svého objevení v roce 2010 byla tato metoda podrobena rozsáhlému testování a kritice. Ukázalo se [3], že MAK 2 funguje spolehlivě pouze v případě, že je efektivita reakce (faktor nárůstu kopií DNA za jednu periodu teplotního cyklu) v exponenciální fázi přibližně konstantní.
Reference
- ↑ Online PCR documentation . 10.11.2015 . Dostupné v archivu pořízeném dne 2016-02-21.
- ↑ BOGGY, Gregory J. A Mechanistic Model of PCR for Accurate Quantification of Quantitative PCR Data . 30.8.2010. Dostupné online.
- ↑ RUIJTER, Jan M. Evaluation of qPCR curve analysis methods for reliable biomarker discovery: bias, resolution, precision, and implications. . 2013. Dostupné online.
Externí odkazy
Obrázky, zvuky či videa k tématu Kvantitativní polymerázová řetězová reakce na Wikimedia Commons
- Otevřený nástroj pro online PCR kvantifikaci (Anglicky)
Text je dostupný za podmienok Creative Commons Attribution/Share-Alike License 3.0 Unported; prípadne za ďalších podmienok. Podrobnejšie informácie nájdete na stránke Podmienky použitia.
Antény
Chemické zdroje elektriny
Chladenie v elektrotechnike
Elektrická sústava automobilu
Elektrická trakcia
Elektrické prístroje
Elektrické súčiastky
Elektrické spotrebiče
Elektrické stroje
Čítanie (elektrotechnika)
Činný výkon
Štatistická dynamika
Živý vodič
Admitancia
Antiparalelné zapojenie
Asynchrónny motor
Blúdivý prúd
Bočník (elektrotechnika)
Diak (polovodičový prvok)
Displej s kvapalnými kryštálmi
Elektrická inštalácia
Elektrická rezonancia
Elektrická sila
Elektrická vodivosť
Elektrické zariadenie
Elektrický obvod
Elektrický zvonec
Elektroenergetika
Elektromer
Elektrometer
Elektromobil
Elektromotor
Elektromotorické napätie
Elektrotechnický náučný slovník
Elektrotechnika
Elektrotechnológia
Fázor
Faradayova klietka
Frekvencia (fyzika)
Graetzov mostík
Impedancia
Indukčnosť
Induktancia
Istič
Izolácia (elektrotechnika)
Izolant
Jadro vodiča
Jednobran
Jednosmerný prúd
Joulovo teplo
Katóda
Koaxiálny kábel
Kompenzácia účinníka
Konduktometria
Konektor (elektrotechnika)
Korónový výboj
Lanko (elektrotechnika)
Leptanie
Logické hradlo
Magnetická susceptibilita
Magnetizácia (veličina)
Merný elektrický odpor
Mobilné zariadenie
Napájací zdroj
Napäťový chránič
Napäťový násobič
Nortonova veta
Odpínač
Odpojovač
OLED
Olovený akumulátor
Paralelné zapojenie
Peltierov článok
Plošná hustota elektrického prúdu
Poistka (elektrotechnika)
Posuvný prúd
Prúdový chránič
Prenosové médium
Prieletový klystrón
Primárny elektrochemický článok
Reaktancia
Rekuperácia (dopravný prostriedok)
Relé
Reproduktorová výhybka
Rezistancia
Rozhranie (interface)
Sériové zapojenie
Seebeckov jav
Sekundárny elektrochemický článok
Settopbox
Skrat
Sonar
Spínač
Spínaný zdroj
Straty v mikropásikových vedeniach
Striedavý prúd
Stupeň ochrany krytom
Svetelná výbojka
Symetrizačný člen
Technická normalizácia
Tepelné relé
Tepelne vodivostný detektor
Termočlánok
Théveninova veta
Transformátor
Transformátor s fázovou reguláciou
Trojfázová sústava
Tuhá fáza (elektronika)
Tyratrón
Usmerňovač (elektrotechnika)
Uzemnenie
Uzol (vodiče)
Vírivý prúd
Výbojka
Varistor
Ventilátor
Vodič (elektrotechnika)
Voltov stĺp
Vstavaný systém
Zásuvka (elektrotechnika)
Zdroj (elektrotechnika)
Zisk antény
Text je dostupný za podmienok Creative
Commons Attribution/Share-Alike License 3.0 Unported; prípadne za ďalších
podmienok.
Podrobnejšie informácie nájdete na stránke Podmienky
použitia.
www.astronomia.sk | www.biologia.sk | www.botanika.sk | www.dejiny.sk | www.economy.sk | www.elektrotechnika.sk | www.estetika.sk | www.farmakologia.sk | www.filozofia.sk | Fyzika | www.futurologia.sk | www.genetika.sk | www.chemia.sk | www.lingvistika.sk | www.politologia.sk | www.psychologia.sk | www.sexuologia.sk | www.sociologia.sk | www.veda.sk I www.zoologia.sk